Оңтайлы концентрацияны қалай анықтауға болады?
IPTG индукторы үшін (изопропил-бета-д-тиогалактозид) концентрация неғұрлым жоғары болса, соғұрлым жақсы.Оңтайлы концентрация нақты тәжірибелік жағдайларға және қажетті индукциялық әсерге байланысты.
Әдетте IPTG концентрациясы 0,1-1 мМ диапазонында қолданылады.Төменгі концентрациялар жасуша өсуіне жағымсыз әсерлерді азайтуы мүмкін және мақсатты ақуыздардың шамадан тыс экспрессиясына байланысты цитотоксикалық әсерді азайтуы мүмкін.Жоғары концентрациялар жасушаның өсуіне және экспрессияның тиімділігіне әсер ететін шамадан тыс жасушалық метаболикалық жүктемені тудыруы мүмкін.
Оңтайлы концентрацияны анықтау тәсілі әртүрлі концентрацияларда IPTG индукциялық сынақтарын жүргізу арқылы мақсатты ақуыздың экспрессия деңгейін бағалау болуы мүмкін.Шағын ауқымды культура сынақтары IPTG концентрацияларының ауқымын (мысалы, 0,1 мМ, 0,5 мм, 1 мМ және т.б.) пайдалана отырып орындалуы мүмкін және әртүрлі концентрациялардағы экспрессия әсерін мақсатты ақуыздың экспрессиялық деңгейін анықтау арқылы бағалауға болады (мысалы, Батыс дақ немесе флуоресценцияны анықтау).Тәжірибе нәтижелері бойынша ең жақсы экспрессиялық әсері бар концентрация оңтайлы концентрация ретінде таңдалды.
Бұған қоса, ұқсас эксперименттік жағдайларда жиі қолданылатын IPTG концентрациясының ауқымын түсіну үшін тиісті әдебиеттерге немесе басқа зертханалардың тәжірибесіне сілтеме жасай аласыз, содан кейін эксперименттік қажеттіліктерге сәйкес оңтайландырып, реттей аласыз.
Оңтайлы концентрация әртүрлі экспрессиялық жүйелерге, мақсатты белоктарға және тәжірибелік жағдайларға байланысты өзгеруі мүмкін екенін ескеру маңызды, сондықтан жеке жағдайда оңтайландырған дұрыс.
Жіберу уақыты: 28 қыркүйек 2023 ж