Айналамызда кәдімгідей көрінгенмен, шын мәнінде үнсіз бізге көп үлес қосып жүрген аты жоқ батырлар көп.Протеиназа К - молекулалық диагностика индустриясындағы «көрсетілмеген қаһарман», саладағы «үлкен және күшті» протеиназамен салыстырғанда, K протеиназасы соншалықты төмен маңызды, сондықтан біз оның маңыздылығын бұрыннан ұмытқанбыз.Жаңа тәждік эпидемияның басталуымен протеиназа К сұранысы күрт өсті, ал үйде және шетелде жеткізілім тұтынудан әлдеқайда артта қалды, және бәрі кенеттен протеиназа К-ның маңызды екенін түсінді.
Протеиназа К не үшін қолданылады?
Протеиназа К - протеолитикалық фермент белсенділігі бар сериндік протеаза және кең ауқымды ортада (рН (4-12,5), жоғары тұзды буфер, 70°С жоғары температура және т.б.) белсенділікті сақтай алады.Сонымен қатар, протеиназа К белсенділігін СДС, мочевина, ЭДТА, гуанидин гидрохлориді, гуанидин-изотиоцианат және т.б. тежемейді, сондай-ақ белгілі бір мөлшерде жуғыш зат К протеиназаның белсенділігін күшейте алады. Медициналық емдеуде (вирустық және микробтық дезинфекцияда). ), тағамдық (етті жұмсақтау), былғары (шаш жұмсарту), шарап жасау (алкогольді тазарту), амин қышқылын дайындау (ыдыраған қауырсындар), нуклеин қышқылын алу, in situ будандастыру және т.б., протеиназа K қолданбалары бар.Ең жиі қолданылатын қолданба - нуклеин қышқылының экстракциясы.
Протеиназа K үлгідегі белоктардың барлық түрлерін, соның ішінде нуклеин қышқылдарымен тығыз байланысқан гистондарды ферменттей алады, осылайша нуклеин қышқылдары үлгіден босатылып, экстракция мен тазартудың келесі қадамын жеңілдету үшін сығындыға шығарылады.Вирустық нуклеин қышқылын анықтауда протеиназа K вирус сынамаларын алу ерітіндісіндегі маңызды компоненттердің бірі болып табылады.Протеиназа K вирустың қабық ақуызын жарып, инактивациялауы мүмкін, ол тасымалдау және анықтау сатысында қауіпсіз;сонымен қатар протеиназа K RNase ыдыратуы мүмкін, сонымен қатар вирустық РНҚ деградациясын болдырмайды және нуклеин қышқылын анықтауды жеңілдетеді.
Протеиназа К-ның бір түндегі даңқы
Ғылыми зерттеулер саласында болсын, IVD саласында болсын, нуклеин қышқылының экстракциясы ең негізгі тәжірибе болып табылады, сондықтан протеиназа К әрқашан өте маңызды тіршілік болды.Дегенмен, бұрын протеиназа K оның рөлінен әлдеқайда аз белгілі болды.Мұның үлкен бөлігі протеиназа К-ның сұраныс пен ұсыныс қатынасы өте тұрақты болғандықтан болды.Протеиназа K жеткізу проблемасы болады деп санайтын адамдар аз.
Жаңа тәждік індеттің басталуымен нуклеин қышқылын сынауға сұраныс артты.2020 жылдың маусым айының аяғында Қытай 90 миллионға жуық жаңа тәждік сынақтарды аяқтады және бұл сан жаһандық ауқымда одан да алаңдатарлық.Нуклеин қышқылын экстракциялау тәжірибелерінде протеиназа К жұмыс концентрациясы шамамен 50-200 мкг/мл құрайды.Әдетте, нуклеин қышқылының үлгісін алу үшін шамамен 100 мкг протеиназа К қажет.Нақты қолдануда нуклеин қышқылының экстракциясының тиімділігін арттыру үшін көбінесе протеиназа К ұлғайтылған мөлшерде қолданылады.Жаңа коронавирустың нуклеин қышқылын анықтау K протеиназасына сұраныстың көп мөлшерін тудырды.Протеиназа К-ның бастапқы сұраныс пен ұсыныс балансы тез бұзылды, ал протеиназа К бір түнде эпидемияға қарсы маңызды материал болды.
Протеиназа К өндірісіндегі қиындықтар
Эпидемияның дамуымен протеиназа К маңызды құндылығын адамдар бағалағанымен, протеиназа К-нің шамадан тыс төмен кілтіне байланысты бірнеше отандық компаниялардың протеиназа К өндірумен айналысқаны ұят. протеиназа К өндірісін орнатуды қалайды Өндіріс процесінде протеиназа К өте ерекше ақуыз екені анықталды.Протеиназа К-ның өндірістік қуатын қысқа мерзімде кеңейту өте қиын.
Протеиназа К-ның ауқымды өндірісі келесі қиындықтарға тап болады
1. Төмен өрнек
Протеиназа K ақуыздардың көпшілігін спецификалық емес түрде ыдыратуы және экспрессиялық иесі жасушаға елеулі уыттылық тудыруы мүмкін.Сондықтан протеиназа К экспрессия деңгейі әдетте өте төмен.К протеиназасын жоғары экспрессиялайтын экспрессиялық жүйелер мен штаммдардың скринингі әдетте ұзағырақ циклды қажет етеді.
2. Пигменттер мен нуклеин қышқылдарының қалдықтары
Кең ауқымды ашыту пигменттің және негізгі нуклеин қышқылының қалдықтарының көп мөлшерін енгізеді.Қарапайым тазарту процесі арқылы бұл қоспаларды жою қиын, ал күрделі тазарту шығындарды арттырады және қалпына келтіру жылдамдығын төмендетеді.
3. Тұрақсыздық
Протеиназа К жеткілікті тұрақты емес, ол өзін-өзі ферменттей алады, қорғаныс агентінсіз оны 37°С-та ұзақ уақыт бойы тұрақты сақтау қиын.
4. Жеңіл тұнбаға түседі
Протеиназа К-ның мұздатылған кептірілген ұнтағын дайындаған кезде, мұздатылған кептірілген ұнтақтағы протеиназа К-ның қатты құрамының көп болуын қамтамасыз ету үшін жоғары концентрацияда мұздатылған кептірілген қорғаныс агентін қосу керек, бірақ протеиназа K концентрациясы 20 мг/мл және одан жоғары жетеді, бұл оңай агрегация преципитат түзеді, бұл жоғары қатты құрамы бар протеиназа К-ны мұздату арқылы кептіруге үлкен қиындықтар әкеледі.
5. Үлкен инвестиция
Протеиназа К күшті протеаза белсенділігіне ие және зертханада басқа протеазаларды гидролиздей алады.Сондықтан, протеиназа K мамандандырылған өндіріс аймақтарын, жабдықтарды және ғылыми-зерттеу және тәжірибелік-конструкторлық жұмыстар мен өндірісті қажет етеді.
XD BIOCHEM протеиназа K ерітіндісі
XD BIOCHEM протеинді экспрессиялау және тазарту платформасына ие және рекомбинантты ақуыздарды экспрессиялау және тазарту және өндіріс процестерін оңтайландыруда бай тәжірибесі бар.Ғылыми-зерттеу және тәжірибелік-конструкторлық топтың жылдам қалыптасуы арқылы протеиназа К-ның ауқымды өндіріс процесі еңсерілді.Мұздатылған кептірілген ұнтақтың ай сайынғы өнімі 30 кг-нан асады.Өнім тұрақты өнімділікке, жоғары ферменттік спецификалық белсенділікке ие және иесінің цитохромы мен нуклеин қышқылының қалдықтары жоқ.XD BIOCHEM компаниясына қош келдіңіз. Сынақ пакетін алыңыз (Электрондық пошта:sales@xdbiochem.comТел: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM техникалық шешімдеріне кіреді
Көп көшірме плазмидті интеграцияны пайдалана отырып, 8 г/л экспрессиялық деңгейі жоғары экспрессиялық штаммдар таңдалады, бұл протеиназа К-нің төмен экспрессиялық деңгейі мәселесін жеңеді.
Көп сатылы тазарту процесін орнату арқылы протеиназа К-нің хост цитохромы мен нуклеин қышқылының қалдықтары стандартты мәннен төмен сәтті жойылды.
Қорғаныш буферлік құрамдарды жоғары өткізу қабілетті скрининг арқылы протеиназа K-ны 37°C температурада тұрақты сақтай алатын буфер таңдалды.
Скринингтік буферлер протеиназа К-ның жоғары концентрацияларда оңай жиналуы және тұнбаға түсуі мәселесін жеңеді және протеиназа К-ның қатты құрамы жоғары мұздату арқылы кептіру үшін негіз қалады.
XD BIOCHEM протеиназа K үлгісі
XD BIOCHEM протеиназа K тұрақтылық сынағы: бөлме температурасында 80 күннен кейін белсенділікте айтарлықтай өзгеріс болмайды.
XD BIOCHEM протеиназа K тұрақтылық сынағы: бөлме температурасында 80 күннен кейін белсенділікте айтарлықтай өзгеріс болмайды.
XD BIOCHEM протеиназа K және бәсекелес өнімдердің нуклеин қышқылының экстракциялық әсерін салыстыру.Нуклеин қышқылын алу процесінде сәйкесінше XD BIOCHEM және бәсекеге қабілетті протеиназа K қолданылады.XD BIOCHEM протеиназа K экстракция тиімділігі жоғарырақ және мақсатты геннің Ct мәні төмен.
Жіберу уақыты: 31 желтоқсан 2021 ж