4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Әсері: ONPG - β-галактозидаза ферментінің болуы мен белсенділігін анықтау үшін арнайы қолданылатын субстрат. β-галактозидаза ферменті болған кезде және белсенді болған кезде, ол ONPG-ны екі өнімге бөледі: o-нитрофенол және галактоза туындысы. O-нитрофенолдың бөлінуі сары түстің өзгеруіне әкеледі, оны спектрофотометр көмегімен өлшеуге болады.

Қолданылуы: ONPG молекулалық биология және биохимия зерттеулерінде бірнеше қолданысқа ие:

β-галактозидаза белсенділігін анықтау: ONPG β-галактозидаза ферментінің белсенділігін өлшеу және сандық бағалау үшін жиі қолданылады. Фермент белсенділігіне тікелей пропорционалды о-нитрофенол түзілу жылдамдығын спектрофотометриялық түрде өлшеуге болады.

Ген экспрессиясы және реттелуі: ONPG көбінесе ген экспрессиясы және реттелуін зерттеуге қатысты эксперименттерде қолданылады. Ол белгілі бір промоторлардың бақылауындағы гендердің экспрессиясын зерттеу үшін жиі қолданылатын lacZ біріктіру жүйесі сияқты біріктіру ақуыздарын талдауда жиі қолданылады. ONPG көмегімен өлшенген бета-галактозидаза белсенділігі ген экспрессиясының деңгейіне түсінік береді.

β-галактозидаза белсенділігін скринингтеу: ONPG рекомбинантты ДНҚ технологиясында β-галактозидазаны кодтайтын LacZ генінің болуы мен функционалдығын анықтау үшін колориметриялық скрининг әдісі ретінде пайдаланылуы мүмкін. Бұл скрининг әдісі қызығушылық тудыратын генді қамтитын клондарды анықтауға көмектеседі.

Фермент кинетикасын зерттеу: ONPG β-галактозидаза ферментінің кинетикасын зерттеуде де пайдалы. Әртүрлі субстрат концентрацияларындағы фермент-субстрат реакциясының жылдамдығын өлшеу арқылы Михаэлис-Ментен тұрақтылары (Km) және максималды реакция жылдамдығы (Vmax) сияқты кинетикалық параметрлерді анықтауға болады.